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實(shí)驗(yàn)十四 葉綠體色素的提取和分離(必修一P97)
一 實(shí)驗(yàn)原理與方法
1.色素的提取原理:葉綠體中的色素是有機(jī)物,不溶于水,易溶于丙酮等有機(jī)溶劑中。提取方法:用丙酮、乙醇等能提取色素。
2.色素分離的原理:層析液是一種脂溶性很強(qiáng)的有機(jī)溶劑。葉綠體色素在層析液中的溶解度不同,溶解度高的隨層析液在濾紙上擴(kuò)散得快,溶解度低的 隨層析液在濾紙上擴(kuò)散得慢。分離方法:紙層析法。用毛細(xì)吸管在濾紙條的下端沿鉛筆線劃一條濾液細(xì)線,待濾液干后再劃一兩次,然后將濾紙條插入層析液中(濾 液細(xì)線不能接觸層析液)。分離結(jié)果:濾紙條上從上到下出現(xiàn)四條色素帶:橙黃色(較窄,胡蘿卜素)、黃色(葉黃素)、藍(lán)綠色(較寬,葉綠素a)、黃綠色(葉 綠素b)。胡蘿卜素與葉黃素之間距離較大,葉綠素a與葉綠素b之間距離較小。
二 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1.加SiO2為了研磨得更充分。
2.加CaCO3防止研磨時(shí)葉綠素受到破壞。因?yàn)槿~綠素含鎂,可被細(xì)胞液中的有機(jī)酸產(chǎn)生的氫代替,形成去鎂葉綠素,CaCO3可中和液泡破壞釋放的有機(jī)酸,防止葉綠體被破壞。
3.加無(wú)水乙醇是因?yàn)槿~綠體色素易溶于無(wú)水乙醇等有機(jī)溶劑。
三 實(shí)驗(yàn)討論: 1.濾紙條上的濾液細(xì)線,為什么不能觸及層析液?
答:濾紙條上的濾液細(xì)線如觸及層析液,濾紙上的葉綠體色素就會(huì)溶解在層析液中,實(shí)驗(yàn)就會(huì)失敗。
2.提取和分離葉綠體色素的關(guān)鍵是什么?
答:提取葉綠體色素的關(guān)鍵是:①葉片要新鮮、濃綠;②研磨要迅速、充分;③濾液收集后,要及時(shí)用棉塞將試管口塞緊,以免濾液揮發(fā)。分離葉綠體色素的關(guān)鍵是:一是濾液細(xì)線要細(xì)且直,而且要重復(fù)劃幾次;二是層析液不能沒(méi)及濾液線。
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