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微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用
1、培養(yǎng)基的種類:按物理性質(zhì)分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基,按化學(xué)成分分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基,按用途分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。
2、培養(yǎng)基的成分一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽P14
3、微生物在固體培養(yǎng)基表面生長,可以形成肉眼可見的菌落。
4、培養(yǎng)基還需滿足微生物對PH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及O2的要求。
5、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵。
6、常用滅菌方法有:灼燒滅菌,將接種工具如接種環(huán)、接種針滅菌;干熱滅菌:如玻璃器皿、金屬用具等需保持干燥的物品。高壓蒸汽滅菌:如培養(yǎng)基的滅菌。
7、用固體培養(yǎng)基對大腸桿菌純化培養(yǎng),可分為兩步:制備培養(yǎng)基和純化大腸桿菌。
8、固體培養(yǎng)基的制備:→稱量→溶化→滅菌→倒平板
9、微生物常用的接種方法:平板劃線法和稀釋涂布平板法。
10、平板劃線法是通過連續(xù)劃線,將菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面,稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,分別涂布到培養(yǎng)基表面。當(dāng)它們稀釋到一定程度后,微生物將分散成單個細(xì)胞,從而在培養(yǎng)基上形成單個菌落。
11、微生物的計數(shù)方法:活菌計數(shù)法、顯微鏡直接計數(shù)法、濾膜法。
12、活菌計數(shù)法就是當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時,培養(yǎng)基表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù),就能推測出樣品中大約含有多少個活菌。統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。因?yàn)楫?dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時,平板上觀察的只是一個菌落。
13、顯微鏡直接計數(shù)也是測定微生物數(shù)量的常用方法,但它包括了死亡的微生物。
14、設(shè)置對照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非診斷因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的.可信度。①如何證明培養(yǎng)基是否受到污染:實(shí)驗(yàn)組的培養(yǎng)基中接種要培養(yǎng)的微生物,對照組中的培養(yǎng)基接種等量的蒸餾水(設(shè)置空白對照)。②如何證明某選擇培養(yǎng)基是否有選擇功能:實(shí)驗(yàn)組中的培養(yǎng)基用該選擇培養(yǎng)基,對照組中培養(yǎng)基用普通培養(yǎng)基(牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基)。如果普通培養(yǎng)基的菌落數(shù)明顯大于選擇培養(yǎng)基中的數(shù)目,則說明該選擇培養(yǎng)基有選擇功能。
15、如何分離分解尿素的細(xì)菌?培養(yǎng)基中以尿素為先進(jìn)氮源,加入酚紅指示劑,如果PH升高,指示劑變紅,可初步鑒定該菌能分解尿素。
16、如何分離分解纖維素的微生物?以纖維素為先進(jìn)碳源的培養(yǎng)基。
17、纖維素酶是一種復(fù)合酶,至少包括三組分:C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖,第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。
18、篩選纖維素分解菌的方法:剛果紅染色法,其原理是剛果紅可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物,但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后,剛果紅—纖維素的復(fù)合物無法形成,培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。(產(chǎn)生了透明圈,說明纖維素被分解了,說明有纖維素分解菌)
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